低速離心機制備細胞膜的分離實驗
發(fā)布時間：2014-10-27 10:35:58??????點擊：
試劑：生理鹽水，0.25mol/L 蔗糖溶液（含0.3mol/LCacl2），0.34mol/L 蔗糖溶液（含0.3mol/LCacl2）；器件：常規(guī)的分離細胞膜的。
1）取空腹12h雄鼠（150g),斷頭處死，放血。解剖取肝臟，迅速用生理鹽水洗凈，用濾紙吸干。取3g肝臟剪碎，經冷的0.25mol/L 蔗糖溶液洗滌數(shù)次，加18ml預冷0.25mol/L 蔗糖溶液勻漿，用雙層尼龍膜過濾，備用。
2）將勻漿的放入離心管中，沿壁小心加入等體積的0.34mol/L 蔗糖溶液覆蓋于樣品上，以700g離心10min.
3）將離心沉淀以0.25mol/L 蔗糖溶液洗滌， 1000g（3500r/min）離心10min，重復一次。
4）離心后沉淀為細胞核，其上有一較疏松的上層，小心吸出此上層，懸于密度d20為1.16的蔗糖溶液（51g/L)中，移入離心管，沿壁加密度d20為1.18的蔗糖溶液（51.5g），覆蓋在樣品層上層。700g（3000r/min）離心10min，細胞膜組分位于兩層溶液界面，小心吸出，置低溫保存，以備進一步分析。
1）取空腹12h雄鼠（150g),斷頭處死，放血。解剖取肝臟，迅速用生理鹽水洗凈，用濾紙吸干。取3g肝臟剪碎，經冷的0.25mol/L 蔗糖溶液洗滌數(shù)次，加18ml預冷0.25mol/L 蔗糖溶液勻漿，用雙層尼龍膜過濾，備用。
2）將勻漿的放入離心管中，沿壁小心加入等體積的0.34mol/L 蔗糖溶液覆蓋于樣品上，以700g離心10min.
3）將離心沉淀以0.25mol/L 蔗糖溶液洗滌， 1000g（3500r/min）離心10min，重復一次。
4）離心后沉淀為細胞核，其上有一較疏松的上層，小心吸出此上層，懸于密度d20為1.16的蔗糖溶液（51g/L)中，移入離心管，沿壁加密度d20為1.18的蔗糖溶液（51.5g），覆蓋在樣品層上層。700g（3000r/min）離心10min，細胞膜組分位于兩層溶液界面，小心吸出，置低溫保存，以備進一步分析。
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