利用離心機(jī)處理與測(cè)定血漿樣品
發(fā)布時(shí)間：2014-4-2 10:59:19??????點(diǎn)擊：
取血漿200μl , 加10 %高氯酸溶液100μl ,漩渦混勻,10 000 r·min - 1離心5 min ,取上清液100μl ,加入NaOH 溶液50μl , 漩渦混勻30 s 后, 加入衍生化試液OPA100μl ,漩渦混勻,置暗處放置10 min ,吸取20μl 進(jìn)樣, 按上述條件測(cè)定,記錄色譜圖和GSH 衍生物峰面積A。
處理方法
1，200，100μl一般用移液槍比較方便，國(guó)產(chǎn)的還是進(jìn)口的你可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求和經(jīng)費(fèi)情況自己選擇
2，我們做血漿樣本時(shí)10 %高氯酸溶液蛋白沉淀，然后要調(diào)pH值的，當(dāng)然你可以試驗(yàn)一下加入NaOH的量，以后不用每管都調(diào)pH的，加固定量就好
3，離心時(shí)轉(zhuǎn)速我們一般就用16000rpm的，效果不錯(cuò)啊，轉(zhuǎn)速的影響沒(méi)有考察過(guò)，但是離心機(jī)轉(zhuǎn)速較高時(shí)比較容易發(fā)熱，如果你的藥熱不穩(wěn)定的話要注意；
4，NaOH 溶液濃度和用量第2點(diǎn)已經(jīng)說(shuō)了
5，加入衍生化溶液后，要暗處放置應(yīng)該是因?yàn)檫@個(gè)衍生化試劑或衍生化反應(yīng)發(fā)生的條件需要避光，這個(gè)試劑應(yīng)該比較成熟了
另外，空白血漿應(yīng)該不是指不加衍生化試劑，而是除了不加藥物，其他試劑和處理方法都和含藥血漿一樣，加衍生化試劑可以知道衍生化試劑對(duì)樣品峰有沒(méi)有干擾。
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