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一、原理1.超氧化物歧化酶(SOD)超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,SOD)是一種能專一地清除超氧離子自由基()的金屬酶,它具有抗衰老、抗輻射、抗炎及抗癌等作用因而在醫(yī)藥、化妝品及食品工業(yè)等方面有了廣泛的應(yīng)用前景。

   SOD是一種酸性蛋白,對熱、pH和蛋白酶的水解較一般酶穩(wěn)定。按照它所含金屬離子的不同,可分為Cu-Zn-SOD(二聚體,藍綠色)、Mn-SOD(紫紅色)和Fe-SOD(黃褐色)三種。SOD催化下述反應(yīng):2+2→+。機體內(nèi)的過量和不足均對機體不利,SOD對過量的的及時清除保證了機體內(nèi)的含量相對的平衡。機體內(nèi)的形成可分為生理性和病理性兩方面。

在一些正常生理過程中會形成一些。例如:呼吸鏈中電子傳遞結(jié)果可產(chǎn)生一些。在某些疾病(如氬中毒、輻射病等)過程中會產(chǎn)生大量的。過量的如不及時清除,會對細胞損傷。SOD將歧化為和,而過氧化氫(物)酶、谷胱甘肽過氧化酶可催化或氧化氫分解,在機體內(nèi)形成一套解毒系統(tǒng),對機體起防護作用。

   原理2.有機溶劑沉淀法分離純化蛋白質(zhì)本實驗采用有機溶劑沉淀法以新鮮豬血為原料,從中提取SOD并進行分離純化。

二、操作步驟

1.SOD的提取

[1]取新鮮豬血200ml于500ml離心管,6000r/min,10min離心,去上層血漿,取下層紅血球粘稠液,然后加入2倍體積的0.9%NaCl溶液清洗,6000r/min,10min離心,棄上層清液,再加入2倍體積的0.9%NaCl溶液重復(fù)清洗一次,6000r/min,10min離心,得洗凈的紅血球粘稠液。

[2]向洗凈的紅血球中加入等體積的蒸餾水,劇烈攪拌30min,使其充分溶血。再向溶血液中緩慢加入預(yù)冷的0.25倍體積的95%乙醇溶液和0.15倍體積的氯仿,勻漿呈暗紅色,再繼續(xù)攪拌15min,4000r/min,10min離心,去變性蛋白沉淀物,得上層液,留樣500ul(樣1)。然后將清液在65-70℃恒溫水浴中進行熱處理,15min后取出迅速冷卻到室溫,4000r/min,5min離心除去沉淀,得淺黃色粗酶液,留樣500ul。

[3]向粗酶液中加入等體積的丙酮溶液,冰箱靜置過夜,6000r/min,10min棄上清液,得沉淀。將沉淀物用等體積預(yù)冷的丙酮溶液清洗兩次,離心收集沉淀,自然干燥即得淡綠色成品,溶于30ml蒸餾水,備用。

      本次來自上海某制藥廠的負責人在完成提取超氧化物歧化酶的實驗后，對實驗所獲取的成果表示非常滿意，更對我們上海盧湘儀生產(chǎn)的DL-8M大容量冷凍離心機以及服務(wù)表示贊賞，愿意與上海盧湘儀離心機儀器有限公司保持長期合作關(guān)系。上海盧湘儀總經(jīng)理李桂梅表示愿意為國內(nèi)制藥行業(yè)的發(fā)展盡一份綿薄之力，更感謝上海某制藥廠對盧湘儀離心機產(chǎn)品的信任與支持，我們將會持之以恒地為貴廠提供最優(yōu)質(zhì)的離心機產(chǎn)品與服務(wù)。